Интересный и довольно детальный разбор работы MDPI https://scholarlykitchen.sspnet.org/2020/08/10/guest-post-mdpis-remarkable-growth/

Всем привет, вы меня уже много выручили, спасибо, и я на пути построения лаборатории дома, уже обзавелся термоциклером, гельэлектрофорезом, закупаю реагенты, жду центрифугу, будем делать трансиллюминатор.

Вот сейчас думаю что проще научиться делать компетентными клетки самому и каждый раз это делать из какой то колонии или купить сосуд Дьюара для хранения и сосуд для транспортировки жидкого азота и морозить комптентные покупные?  Ещё вопрос, если первый способ, то каким образом лучше обеспечить сохранность колонии на антибиотике даже возможны мутации я так понимаю и некомпетеные клетки как обычно хранят ? Речь про ecoli например и хим трансформацию . Хотя, что проще тоже вопрос, хим трансформация или электро , если делать самому компетентные для этого типа трансформации клетки.

Имхо проще делать клетки самому, протоколов подготовки клеток для химической трансформации очень много и они совсем не сложные. Для электротрансформации нужен электропоратор, поэтому возможно лучше хим. Некомпетентные хранят в глицерине, если нет -80 то и на -20 можно вполне

Электропоратор делают из пьезо зажигалки элемента , видели тут статью, но наверное сложнее, да

Долго можно хранить на -20?

Время от времени размораживать и делать новую колонию смысл имеет ?

А если не секрет, в чем идея замутить лабу прямо таки дома? И насколько дом большой и крутой при этом?)

Я до года хранила точно, дальше не пробовала. Да, нужно  периодически размораживать и обновлять культуру

Да обычный дом , комнату выделили под это , хобби , хочется сейчас этим позаниматься.

А как делается обновление и с какой периодичностью?

Компетешки без замораживания много менее компетентны.
На -20 может и норм, но не пробовал.
Глицериновый сток не мутирует никуда.

Про глицерин понял

Try not to freeze/thaw your glycerol stock too many times. Placing the glycerol stock on dry ice while streaking onto LB agar will prevent it from thawing completely and will improve the shelf life.

Замораживать на -20 некомпетентные.

Разморозка, пересев на питательную среду, наращивание массы и снова заморозка. Обычно используют lb агар / бульон. Периодичность 100% не скажу, где-то раз в год

Спасибо большое, а какой протокол для хим компетентности используете ? Можете поделиться ?

Какие преимущества между бульоном и агаром в наращивании колонии ?

Inoue et al. Погуглите.

Благодарю

CaCl2 Competent Cells.pdf