IF
IRES очень разный уровень экспресии даст
Size: a a a
2021 April 24
G
2 раза SV40 сделай
A
а то что так два гена будут смотреть друг на друга?
IF
Есть системы, где с одной плазмиды несколько gRNA для криспра экспрессируются, посмотрите, как там сделано... Но там короткие продукты, четыре прям гена в одной плазмиде это как-то малореалистично имхо
AD
Всм? От условной середины в одну сторону - один промотор, в другую - другой
A
да, но их же 4 в одном векторе, значит крайние из такой кассеты смотрят друг на друга, не? или я не понял схему
DR
Смотрят, прям попками трутся)
AD
Между ними аппарат бактериальной экспрессии (ну я себе так представил)
G
ну между ними кинь маркеры, ori и уже будут не друг на друга смотреть
AD
Так что попками трутся, но не смотрят, лол
A
а если представить, что смотрят, то есть вот такой участок будет:
-ген>терминатор|терминатор<ген-
это может привести к плохим последствиям? то есть между такими кассетами ничего не будет
-ген>терминатор|терминатор<ген-
это может привести к плохим последствиям? то есть между такими кассетами ничего не будет
AD
Не попробуешь - не узнаешь
А прям сильно надо именно в одну конструкцию всё засунуть? На две разбить никак?
А прям сильно надо именно в одну конструкцию всё засунуть? На две разбить никак?
G
можно попробовать, но зачем так делать?
A
хочется это еще в транспозоны завернуть и в геном все отправить одним действием, а не двумя последовательными(
AD
Лучший вариант тут - это сделать 4 одинаковые конструкции и потом котрансфекцию, только количество транспозазы мб поподбирать надо будет
AD
Потому что придумать огромную херню для экспрессии 4 орфов, а потом ещё её собрать - это ж задолбаться
A
так она уж собрана, даже работает, но там все рамки в одну сторону смотрят друг за другом) даже в геном заходит
A
Благо с goldenGate это собирать не сложно
G
если все хорошо работает, то для чего менять все?
A
работает, но не хорошо, как минимум 2 белка в такой конструкции очень слабо нарабатываются