Size: a a a

2020 July 23

V

VAS in Science FYI
Александр Грицай
А до скольки градусов крышка должна греться кстати ? Постоянная температура или тоже циклы ?
На ПЦР обычно просто держится 100-110, мы в лабе по долгу гоняем реакции при 45-50 и ставим крышки на 10 градусов больше лунок. Мол, так дольше жить будут.
источник

AB

Alex Beliavskaia in Science FYI
VAS
а если хочется коммерческую, вроде Q5? Мы, кстати, пытались выгнать свою Vent exo- и почему-то вышла нестабильная хрень, в сравнении с коммерческой от NEB(
Внезапно 😁
источник

V

VAS in Science FYI
Alex Beliavskaia
Внезапно 😁
?)
источник

AB

Alex Beliavskaia in Science FYI
Ну я не верю в то, что частник или маленькая лаба может соревноваться с разработками рнд НЕБа и его налаженным производством
источник

V

VAS in Science FYI
полимераза то, по сути не запатентованная...
В другой лабе PI гнал свою Pfu из-под полы и выходило норм...
источник

OB

Olga Brovkina in Science FYI
VAS
полимераза то, по сути не запатентованная...
В другой лабе PI гнал свою Pfu из-под полы и выходило норм...
Ну а активность стабильную он обещал для такой полимеразы?
источник

AB

Alex Beliavskaia in Science FYI
VAS
полимераза то, по сути не запатентованная...
В другой лабе PI гнал свою Pfu из-под полы и выходило норм...
Норм, да. Но если есть деньги, я бы предпочту купить с гарантией качества. Научный diy  это либо от бедности, либо от безделья, имхо
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
VAS
а если хочется коммерческую, вроде Q5? Мы, кстати, пытались выгнать свою Vent exo- и почему-то вышла нестабильная хрень, в сравнении с коммерческой от NEB(
Q5 мы покупаем
Taq, Phusion самодельные
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
Alex Beliavskaia
Норм, да. Но если есть деньги, я бы предпочту купить с гарантией качества. Научный diy  это либо от бедности, либо от безделья, имхо
Безусловно

Но просто если есть рабочие протоколы внутри лабораторные, то можно и кайфовать
Taq самодельная отлично работает, в любом случае она только для ПЦР с колоний и тп

Самодельная Phusion чуть медленнее термовской/неба, но тоже отличная, точность условно такая же (не заметили , чтобы она ошибки липила). Так что только буферы к ней покупать приходится отдельно, ибо это коммерческая тайна
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
Alex Beliavskaia
Норм, да. Но если есть деньги, я бы предпочту купить с гарантией качества. Научный diy  это либо от бедности, либо от безделья, имхо
В эту же копилку самодельные TEV и precision протеазы. Копилочки на них не напасешься
источник

V

VAS in Science FYI
Ekaterina Shestakova
Q5 мы покупаем
Taq, Phusion самодельные
а зачем и Phusion и Q5? Они же вроде оч похожи...
По буферру, при желании можно нащупать, но предполагаю, что они не дорогие.
источник

OB

Olga Brovkina in Science FYI
В принципе, если есть готовая "кухня" в лабе, то почему бы и своей полимеразы не наварить. Мы, например, клонированием не часто занимаемся, посчитали, что выгоднее в Еврогене заказать. А у знакомых, например, клонирование постоянно востребовано, в любой момент, какие хочешь гидовые РНК расклонируют, почистят
источник

V

VAS in Science FYI
Alex Beliavskaia
Норм, да. Но если есть деньги, я бы предпочту купить с гарантией качества. Научный diy  это либо от бедности, либо от безделья, имхо
Я тоже предпочитаю всё покупное, но для того, что мы делаем, NEBовские ферменты краней нестабильного качества и концентрации. Поэтому смена стока - маленькая трагедия, а если он из другой партии, то вообще всё плохо.
И по этому причине хотели выгнать одну большу партию, чтоб очень надолго хватило.
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
VAS
а зачем и Phusion и Q5? Они же вроде оч похожи...
По буферру, при желании можно нащупать, но предполагаю, что они не дорогие.
потому что Q5 коммерческую юзаешь тогда, когда нужно супер точно и надо быть уверенным
самодельная Phusion идет , как будто это Taq - на все, что хочешь в любом количестве

+ иногда Q5 поднимает то, что не поднимает Phusion
источник

V

VAS in Science FYI
логично. Думал Phusion тоже коммерческая, кстати (тайна). Good to know, что это не так
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
VAS
Я тоже предпочитаю всё покупное, но для того, что мы делаем, NEBовские ферменты краней нестабильного качества и концентрации. Поэтому смена стока - маленькая трагедия, а если он из другой партии, то вообще всё плохо.
И по этому причине хотели выгнать одну большу партию, чтоб очень надолго хватило.
ну не знаю
к их Q5 у меня претензий нет вообще.
и к парочке их рестриктаз тоже.

T4 и T7 DNA ligase (NEB)  обе отличные
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
VAS
логично. Думал Phusion тоже коммерческая, кстати (тайна). Good to know, что это не так
ну последовательность белка-то нет)
а буферы да
источник

OG

Olga Gibadullina in Science FYI
Ребята, кто-нибудь знает в Москве и Санкт-Петербурге научные группы, где занимаются эпидемиологией в западном понимании, то есть определение влияния факторов на заболевания?
источник

V

VAS in Science FYI
Ekaterina Shestakova
ну не знаю
к их Q5 у меня претензий нет вообще.
и к парочке их рестриктаз тоже.

T4 и T7 DNA ligase (NEB)  обе отличные
у нас Vent, фи29 и пара никаз. Зацепка в том, что мы работаем на мономолекулярных реакциях в эмульсиях, и отклонение в концетрации/концетрации рабочих молекул сильно сказывается. А для крупных реакций "активность более Х у.е." самое то.
Мы сталкивались с тем, что они сами не знают, какова концентрация фермента, пока не измеряли по запросу
источник

ES

Ekaterina Shestakova in Science FYI
VAS
у нас Vent, фи29 и пара никаз. Зацепка в том, что мы работаем на мономолекулярных реакциях в эмульсиях, и отклонение в концетрации/концетрации рабочих молекул сильно сказывается. А для крупных реакций "активность более Х у.е." самое то.
Мы сталкивались с тем, что они сами не знают, какова концентрация фермента, пока не измеряли по запросу
🤦🤷
источник