В рейтинге участвует:

групп:

каналов:

Виртуальный сервер на SSD - недорого!

Аренда выделенных и виртуальных серверов (VDS/VPS), хостинг, аренда IP-адресов, администрирование, круглосуточная поддержка

qwarta.ru подробнее

Резервное копирование с проверкой на вирусы!!!

Удобный сервис создания резервных копий на любой сервер сети интернет. Отслеживайте изменения, проверяйте на вирусы. Надежно защитите свой бизнес!

go.backupland.com

Выбираете сервер? Любая конфигурация на заказ!

Аренда физических серверов любых конфигураций под любые запросы - 1С бухгалтерия, игровые сервера, нагруженные проекты, интернет-магазины!

qwarta.ru подробнее

Size: a a a

Science FYI

2213 membersпожаловаться на группу
2020 October 06

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
на какую температуру нужно смотреть lдля праймеров при расчете в калькуляторе?
На вторую вроде.

Если тебе просто на работать ампликон, то нарисуй праймер в диапазоне 50-60 градусов.
Отжиг на ампдификаторе поставить 50-52 и не парься.

Если тест систему делаешь, или просто пцр-рв, то ставь Отжиг исходя теоретической Тм. А лучше градиент температур
источник
20:43пожаловаться#1

..

. . in Science FYI
Для амплификаций фрагментов на обычном пцр не смотрю обычно на Отжиг, все проходит отлично. Если неспецифики много - чутка повышаю температуру
источник
20:45пожаловаться#2

MN

Mr. Nobody in Science FYI
. .
На вторую вроде.

Если тебе просто на работать ампликон, то нарисуй праймер в диапазоне 50-60 градусов.
Отжиг на ампдификаторе поставить 50-52 и не парься.

Если тест систему делаешь, или просто пцр-рв, то ставь Отжиг исходя теоретической Тм. А лучше градиент температур
ясно, будет ли праймер отплавляться на концах, если он A-T rich на концах? мне не для ПЦР
источник
20:49пожаловаться#3

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
ясно, будет ли праймер отплавляться на концах, если он A-T rich на концах? мне не для ПЦР
Ситуация печальная, если много а-т на 3' конце. На 5' не так важно
источник
20:54пожаловаться#4

MN

Mr. Nobody in Science FYI
. .
Ситуация печальная, если много а-т на 3' конце. На 5' не так важно
хорошо
источник
20:54пожаловаться#5

MN

Mr. Nobody in Science FYI
. .
Ситуация печальная, если много а-т на 3' конце. На 5' не так важно
5` ATAATATA 3` такой праймер допустим, какая для него температура нужна, чтобы лигаза могла сшить его с другим праймером?
источник
20:57пожаловаться#6

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
А ваша лигаза работает выше 37-и?
источник
21:01пожаловаться#7

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
5` ATAATATA 3` такой праймер допустим, какая для него температура нужна, чтобы лигаза могла сшить его с другим праймером?
Не понял задачу. Лигировать лигазой одноцепочечные олиги длинной 8 нуклеотидов? Может проще как-то пцр перекрытием синтезнуть ген?
источник
21:01пожаловаться#8

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
Думаю, нет, или недолго. Тогда нарисуйте олиг на 50 градусов, и всё получится. Наверное. Может там такая матрица, что вторичные структуры попрут. Тогда всю систему менять надо (с)
источник
21:03пожаловаться#9

MN

Mr. Nobody in Science FYI
Dmitry Dianov
А ваша лигаза работает выше 37-и?
обычная ambient температура, 37 это только оптимум для 100% активности как я понял
источник
21:03пожаловаться#10

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
Комнатная, в смысле?
источник
21:04пожаловаться#11

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
обычная ambient температура, 37 это только оптимум для 100% активности как я понял
Опиши задачу, пжлст, а то я в замешательстве
источник
21:05пожаловаться#12

MN

Mr. Nobody in Science FYI
Dmitry Dianov
Комнатная, в смысле?
ну при 37 такой короткий олиг отплавиться, поэтому надо меньше
источник
21:05пожаловаться#13

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
А зачем он такой короткий?
Вот да, расскажите вашу идею.
источник
21:07пожаловаться#14

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
ну при 37 такой короткий олиг отплавиться, поэтому надо меньше
Начнём с того, что мало вероятно, что олиг только с а-т сядет на днк. Такой короткий тем более
источник
21:08пожаловаться#15

MN

Mr. Nobody in Science FYI
. .
Не понял задачу. Лигировать лигазой одноцепочечные олиги длинной 8 нуклеотидов? Может проще как-то пцр перекрытием синтезнуть ген?
есть такой метод: два олига (у меня по 8nt) отжигают на 3-ем (16nt) и потом сшивают лигазой
источник
21:10пожаловаться#16

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
NdeI-липкие концы в две буквы TA таки отжигаются, и что-то там клонируется...
источник
21:10пожаловаться#17

DD

Dmitry Dianov in Science FYI
Mr. Nobody
есть такой метод: два олига (у меня по 8nt) отжигают на 3-ем (16nt) и потом сшивают лигазой
А зачем?
источник
21:11пожаловаться#18

MN

Mr. Nobody in Science FYI
Dmitry Dianov
А зачем?
чтобы получить dsDNA с тупыми или липкими концами
источник
21:12пожаловаться#19

..

. . in Science FYI
Mr. Nobody
есть такой метод: два олига (у меня по 8nt) отжигают на 3-ем (16nt) и потом сшивают лигазой
Как-то замороченно слишком. Проще заказать праймер за 400 рублей и на 5'конец всунуть нужный сайт рестрикции
источник
21:12пожаловаться#20